期刊简介
本刊是卫生部主管、中国康复医学会和中日友好医院主办的医学学术核心期刊。为国家科技部中国科技信息中心科技论文统计源期刊，被国内各权威数据库收录。主要任务是报道国内外脊柱脊髓领域的最新学术进展，为临床医疗、康复及基础研究工作者提供学术交流场所。2003年已改为月刊，2006年内文增至80页，国内外公开发行。读者对象为从事脊柱外科、骨科、神经科、泌尿科、肿瘤科、放射科、康复科及基础研究等相关学科的专业技术人员。
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首页>中国脊柱脊髓杂志
- 杂志名称：中国脊柱脊髓杂志
- 主管单位：中国脊柱脊椎杂志
- 主办单位：中华人民共和国卫生部
- 国际刊号：11-3027/R
- 国内刊号：11-3027/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：卫生部医药卫生优秀期刊二等奖（05首届）期刊收录：北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏, 维普收录(中), 知网收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 上海图书馆馆藏, CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中)
重组腺相关病毒转导NIH3T3建立神经生长因子真核表达细胞株的研究
马巍；刘淼；杨广笑；王全颖
关键词：重组腺相关病毒(rAAV), 人神经生长因子(hNGF), NIH3T3细胞株, 真核表达, 生物活性
摘要：目的:探讨重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)转导美国国家健康研究中心建系的小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryo fibroblast,NIH3T3)建立神经生长因子β(nerve growth factor subunitβ,NGFβ)真核表达细胞株可行性,并检测其生物活性.方法:使用表达NGFβ的重组腺相关病毒感染NIH3T3细胞,取感染重组病毒的3T3细胞培养基上清,经表达蛋白提取和浓缩,肝素-Sepharose CL-6B亲和层析柱的纯化;酶免疫斑点法检测表达蛋白的NGFβ抗原活性;Coomassic亮蓝G250法测定表达蛋白的浓度;十二烷基硫酸-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfat-polyarylanide gel electrophoresis,SDS-PAGE)分析检测表达蛋白的分子量,计算表达蛋白占总蛋白的比率;鸡胚背根神经节突起生长实验和小鼠嗜铬瘤细胞(mouse adrenal pheochromocytoma cells,PC12)无血清培养生长刺激5溴-2-脱氧尿嘧啶(5-bromo-2-deoxyurididne,Brdu)掺入实验观察真核表达蛋白的生物学活性.结果:转导的3T3细胞具有13.6kd的表达蛋白,每升细胞培养基中可以获得400～500μg NGFβ蛋白,表达蛋白纯度可达95.4%以上.表达蛋白具有很强的NGF抗原活性.鸡胚背根神经节突起生长实验显示真核表达的NGFβ在10ng/ml时有明显的促进突起生长作用,PC12细胞的Brdu掺入实验显示当NGFβ的使用量达10ng/ml时达到大的平台期,生物活性按生物制品鉴定章程判断为1×108BU(生物活性单位)/g.结论:使用重组腺相关病毒转导NIH3T3细胞可建立长期表达人NGFβ的NIH3T3细胞株,并表达出具有活性的NGFβ蛋白.
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