期刊简介
本刊是卫生部主管、中国康复医学会和中日友好医院主办的医学学术核心期刊。为国家科技部中国科技信息中心科技论文统计源期刊，被国内各权威数据库收录。主要任务是报道国内外脊柱脊髓领域的最新学术进展，为临床医疗、康复及基础研究工作者提供学术交流场所。2003年已改为月刊，2006年内文增至80页，国内外公开发行。读者对象为从事脊柱外科、骨科、神经科、泌尿科、肿瘤科、放射科、康复科及基础研究等相关学科的专业技术人员。
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首页>中国脊柱脊髓杂志
- 杂志名称：中国脊柱脊髓杂志
- 主管单位：中国脊柱脊椎杂志
- 主办单位：中华人民共和国卫生部
- 国际刊号：11-3027/R
- 国内刊号：11-3027/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：卫生部医药卫生优秀期刊二等奖（05首届）期刊收录：北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏, 维普收录(中), 知网收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 上海图书馆馆藏, CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中)
shRNA-Piezo1对异常机械牵张应力作用下髓核细胞凋亡的影响及相关机制
谭洪宇；赵亮；张扬
关键词：髓核细胞, Piezo1蛋白, shRNA干扰, 牵张应力, 凋亡
摘要：目的:探讨短发夹RNA沉默压电离子蛋白1编码基因(shRNA-Piezo1)对异常机械牵张应力作用下髓核细胞凋亡的影响及相关机制.方法:取8例腰椎间突出症患者术中摘取的椎间盘组织(改良Pfirrmann分级为Ⅱ级或Ⅲ级),分别分离培养髓核细胞,取第2代髓核细胞构建体外机械牵张应力模型;利用293T细胞作为慢病毒感染靶细胞,检测适慢病毒滴度,用适滴度慢病毒感染髓核细胞;应用RT-PCR和Western-Blot法筛选出有效干扰序列,利用shRNA干扰技术构建shRNA-Piezo1干扰质粒;根据预实验处理结果,将细胞分成4组:空白对照组(取第2代髓核细胞不做机械牵张应力处理),牵张应力组(取第2代髓核细胞机械牵张应力处理24h),shRNA阴性对照组(空白载体质粒+第2代髓核细胞机械牵张应力处理24h),shRNA干扰组(shRNA-Piezo1干扰质粒+第2代髓核细胞机械牵张应力处理24h),应用Fluo3-AM试剂盒检测4组细胞的细胞质Ca2+水平;Cell Meter检测试剂盒检测4组细胞中线粒体膜电位的变化;AnnexinV-FITC试剂盒检测4组细胞的凋亡率.结果:(1)分离培养的细胞Ⅱ型胶原蛋白和Aggrecan蛋白表达阳性,符合髓核细胞特征.(2)当髓核细胞转染复数(MOI)=50时,慢病毒滴度为1×108TU/ml转染效率高.(3)homo-3201序列为shRNA-Piezo1的有效序列.(4)4组髓核细胞细胞质Ca2+含量、线粒体膜电位翻转比例和细胞凋亡率有显著性差异(P＜0.05),空白组与shRNA阴性对照组比较无显著性差异(P＞0.05);shRNA干扰组与牵张应力组和shRNA阴性对照组比较均显著性减少(P＜0.05),与空白对照组比较无显著性差异(P＞0.05).结论:shRNA-Piezo1可以抑制异常机械牵张应力作用下髓核细胞的过度凋亡,而且是通过抑制细胞质Ca2+水平和线粒体膜电位翻转来实现的.
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